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某些凝集素可與血管內(nèi)皮細(xì)胞上的糖鏈特異性結(jié)合,因而常被用于血管的標(biāo)記和可視化觀察。雖然可以用這些凝集素直接對組織切片進(jìn)行染色,但也可以通過靜脈注射帶有標(biāo)記的凝集素,這樣可以優(yōu)先對內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行染色,并觀察凝集素在血管中的滲漏情況,該操作可以在活體動物或離體組織上進(jìn)行。番茄凝集素(Lycopersicon esculentum (Tomato) lectin,LEL)對不同小鼠組織的染色就是一個優(yōu)秀案例,具體可參閱Robertson 等人的研究報告(Ref.89)。由于不同物種內(nèi)皮細(xì)胞上的糖鏈存在差異,建議針對您感興趣的物種選擇合適的凝集素(如番茄凝集素常用于嚙齒類動物),以獲得最-佳染色信號。有關(guān)用于血管成像的不同試劑的更多信息,請參閱 Lokmic 和 Mitchell的研究報告 (Ref.90)。
異常的血管形態(tài)是腫瘤的特征之一,也是對整個腫瘤提供分子或細(xì)胞治療的障礙(Ref.91)。Park等人設(shè)計了一種通過抗體遞送藥物使腫瘤血管系統(tǒng)正常化的治療策略。他們通過在神經(jīng)膠質(zhì)瘤小鼠模型中,將LEL進(jìn)行血管灌注后進(jìn)行染色,證明了藥物對腫瘤血管生成的調(diào)節(jié)作用(Ref.29)。
精選文獻(xiàn)
• Imaging host vascularization of engrafted tissues (Ref. 5)
• Analysis of vascular permeability and visualization of microvessels (Ref. 23)
• Quantifying tissue vascularization for tissue engineering (Ref. 33)
• Detection and quantification of tumor angiogenesis (Ref. 21)
• Determination of drug delivery on vascular organization (Ref. 29)
• Vascular endothelial staining standard for methodology comparison (Ref. 27)
實驗流程概覽
制備凝集素溶液
• 使用無菌PBS將凝集素溶解或稀釋至0.5-2ug/ml;
• 注射前,將試劑平衡至室溫。
注射
• 使用適當(dāng)?shù)姆椒s束動物,為注射做準(zhǔn)備;
• 觀察并準(zhǔn)備注射部位,即尾側(cè)靜脈;
• 靜脈注射凝集素溶液(100-200ul);
• 輕輕按壓以封閉注射部位。
處死*
• 注射后15-30分鐘處死動物。
樣本制備、成像
• 收集所需的組織進(jìn)行分析和處理,以便后續(xù)圖片捕獲;
• 通過所需技術(shù)捕獲圖像。
*所有動物處理方法和技術(shù)都必須遵守 IACUC((Institutional Animal Care and Use Committee)) 的指導(dǎo)方針,并符合實驗動物機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的方案。

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