硫磺素T (Thioflavin T，ThT) 是一種苯并噻唑鹽類的陽離子熒光染料。它最初在紡織業(yè)中用作染料，后因其在生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)研究中的獨(dú)特-價(jià)值而備受關(guān)注——作為一種高度特異性的熒光探針，ThT可在與淀粉樣蛋白原纖維結(jié)合后熒光增強(qiáng)。因而常被用于檢測(cè)堆疊的β折疊聚集體。

具體步驟如下：

1??. 使用dH2O制備1mM的硫黃素T儲(chǔ)備液 (需現(xiàn)配現(xiàn)用，并用2µm注射式過濾器過濾)；

2??. 使用pH7.4的PBS對(duì)硫磺素T儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋，最終濃度為25µM(每孔體積100µL)；

3??. 室溫下解凍α-突觸核蛋白/Tau蛋白樣品；

4??. 將10μM α-突觸核蛋白/Tau蛋白原纖維或100μM單體(或兩者混合)加入到合適的板孔中。用移液器上下混合均勻。

注：該濃度是估計(jì)值，具體實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行優(yōu)化以獲得較理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，且不會(huì)造成樣本的浪費(fèi)。

5??. 對(duì)板孔進(jìn)行密封并放置于震蕩孵育器上(800rpm)，溫度為37℃；

6??. 使用全波長(zhǎng)熒光型酶標(biāo)儀讀取熒光讀數(shù)。

7??. 再次將孔板密封放置于震蕩孵育器上, 溫度為37℃。

8??. 在1到72小時(shí)之間的固定間隔進(jìn)行讀值。

• 溫度：37°C    

• 讀取類型：全孔掃描     

• 波長(zhǎng)：發(fā)射波長(zhǎng)450nm  激發(fā)波長(zhǎng)485nm

• PMT Gain：自動(dòng)         

• 每次讀取閃爍：6          

• 震動(dòng)：讀數(shù)前 20秒

注：以上操作步驟引自StressMarq品牌上對(duì)α-突觸核蛋白及Tau蛋白硫磺素T檢測(cè)。廠家原網(wǎng)-址鏈接為：Alpha Synuclein Thioflavin T Assay Protocol | StressMarq

StressMarq Biosciences成立于2007年, 總部位于加拿大維多利亞市, 是一家專業(yè)的生物試劑供應(yīng)商。其在開發(fā)和商業(yè)化一系列預(yù)制原纖維、寡聚體和單體蛋白方面處于領(lǐng)-先地位, 這些蛋白對(duì)于神經(jīng)退行性疾病(阿爾茨海默病、帕金森病等)的研究至關(guān)重要, 包括：α-突觸核蛋白(alpha synuclein)、Tau蛋白、β淀粉樣蛋白(amyloid beta)和超氧化物歧化酶1(SOD1)等。StressMarq的產(chǎn)品范圍還涵蓋多種抗體、試劑盒、小分子以及其他類型蛋白質(zhì)。這些產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)、癌癥研究及細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等多個(gè)生命科學(xué)領(lǐng)域,為各類科學(xué)研究提供了全面支持。

● 蛋白：專注于開發(fā)與神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)的特色產(chǎn)品，涵蓋α-突觸核蛋白、Tau蛋白和β-淀粉樣蛋白的預(yù)制原纖維、寡聚體及單體結(jié)構(gòu)

● 抗體：數(shù)百種與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、神經(jīng)科學(xué)、癌癥和心血管系統(tǒng)相關(guān)的高品質(zhì)單克隆和多克隆抗體

● 試劑盒：涉及細(xì)胞信號(hào)和氧化應(yīng)激等領(lǐng)域，如DNA Damage (8-OHdG) ELISA Kit

● 小分子：涉及癌癥和神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域300余種抑制劑、拮抗劑、激動(dòng)劑、激活劑和配體

★ α突觸核蛋白預(yù)制原纖維(PFF)&單體

★ α突觸核蛋白寡聚體

★ Tau蛋白單體、寡聚體和預(yù)制原纖維（PFF）

★ β淀粉樣肽單體、寡聚體和預(yù)制原纖維（PFF）